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ArcticExpress(DE3) 感受態細胞

簡要描述:ArcticExpress(DE3) 感受態細胞 保存條件:-80℃ 基因型E.coli B F– ompT hsdS(rB–mB–) dcm+
TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]

  • 產品型號:ABG225-50
  • 產品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-27
  • 訪  問  量:417

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABG225-50
規格50X100ul供貨周期現貨
主要用途感受態細胞應用領域環保,食品/農產品,化工,生物產業,制藥/生物制藥

基因型

E.coli B F– ompT hsdS(rB–mB–) dcm+TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]


簡要說明

ArcticExpress (DE3)來源于E. coli B,為Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株,可促進表達蛋白的穩定。ArcticExpress(DE3)菌株染色體DNA中整合了λ噬菌體DE3區,使得ArcticExpress(DE3)菌株可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,廣泛用于pET系列,pGEX,pMAL等質粒的蛋白表達。ArcticExpress(DE3)菌株具有四環素,qing大霉素抗性,endA1突變有利于質粒DNA的穩定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress(DE3)可以表達適應低溫的伴侶蛋白Cpn10和Cpn60(來自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10和Cpn60伴侶蛋白在4-12℃表現出較高活性,在ArcticExpress (DE3)細胞中表達時,可降低重組蛋白包涵體的形成,增加可溶重組蛋白的表達量及生物活性,比傳統的原核表達伴侶蛋白GroEL、GroES等具有更加優異的促融性能。ArcticExpress (DE3)感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率達108cfu/μg DNA。


操作說明

1、ArcticExpress (DE3) 感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,待菌塊融化,加入目的質粒,并用手撥EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率

3. 向離心管中加入700 µl不含抗生素的無菌LB培養基,混勻后37℃,200rpm復蘇60分鐘。

 4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 µl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上(平板中務必同時含有34µg/ml的lu霉素,40µg/ml的qing大霉素和轉化質粒本身的篩選抗生素;若質粒濃度較高,也可稀釋后涂板,務必保證能在平板上挑到單克隆菌落)。 

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。


注意事項

1、感受態細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。除復蘇培養基為無抗生素外,其余所用培養基、培養液均應含有40ug/ml的、qing大霉素,以防質粒丟失。

3. 為獲得需要量的蛋白,最佳誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優化。

4. ArcticExpress (DE3)感受態細胞具有四環素、qing大霉素抗性,不可用于具有四環素、qing大霉素抗性質粒的轉化。













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  • 郵箱:sale@abnbio.com

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