基因型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS(CamR)

簡要說明

BL21Star(DE3)pLysS 菌株來源于BL21(DE3)，含有rne131突變（RNaseE基因），RNaseE 基因的突變降低了內源RNase的積累，增強菌株細胞內mRNA 的穩定性，從而提高異源蛋白的表達水平。主要適用于T7 啟動子表達載體(如pET系列)的高水平蛋白表達，同時含有大腸桿菌 RNA聚合酶，也可用于非T7啟動子表達載體（pGEX，pMAL等）的蛋白表達。由于BL21 Star(DE3)菌株的異源基因基礎表達水平較高，所以不適合毒性蛋白的表達。BL21 Star(DE3)pLysS 菌株攜帶pLysS 質粒，具有氯lu素抗性。pLysS 含有表達 T7溶jun酶的基因，T7溶jun酶可以作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，還可與T7RNA聚合酶結合抑制其轉錄活性，進而降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG 誘導的表達。pLysS 質粒含有p15A復制起始子，可以和含有 pUC或 pBR322 等復制起始子的質粒兼容。BL21 Star(DE3)pLysS感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率達107 cfu/μg DNA。

操作說明

1、BL21 Star(DE3)pLysS 感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質粒并用手拍EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激 45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

 3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養基，混勻后37℃， 200 rpm 復蘇60 分鐘。

4.5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。-

注意事項

1、感受態細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

4. 誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2mM 均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化6. BL21 Star(DE3)pLysS 菌株攜帶pLysS質粒，除復蘇培養基為無抗生素外，其余所用培養基、培養液均應含有34µg/ml氯lu素，以防質粒丟失。