XL1-Blue Chemically Competent Cell

基因型：

recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 (rk-,mk+), relA1lac [F'proAB lacIqZ?M15: Tn10 (tetR)]

簡要說明：

XL1-Blue菌株能保證高拷貝質(zhì)粒穩(wěn)定復(fù)制，recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。hsdR17突變導(dǎo)致EcoK核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)缺失，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量。lacIqZΔM15 的存在使XL2-Blue菌株可用于藍(lán)、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素抗性。High5TM系列XL1-Blue感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>1×109cfu/μg。

操作說明：

1.XL1-Blue感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2.混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。